葛根為豆科植物野葛的干燥根。2005版《中國藥典》一部采用高效液相色譜法測定其葛根素的含量。
2005版《中國藥典》葛根含量測定項下:
- 色譜條件與系統適用性試驗
以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水(25:75)為流動相;檢測波長為250nm。理論板數按葛根素峰計算應不得低于4000。
2、供試品溶液的制備
取本品粉末約0.1g,用百分之一電子天平精密稱定,置錐形瓶中,精密加入30%乙醇50ml,稱定重量,加熱回流30分鐘,放冷,再稱定重量,用30%乙醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液,即得。
HPLC法測定葛根及其制劑中葛根素的含量時,使用最多的流動相系統為甲醇-水系統,另外還有甲醇-水,加醋酸調節pH等。
3、其他測定
測定心血寧滴丸中葛根素的含量,采用高效液相色譜法,色譜柱(4.6mm×200mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(30:2 :65)為流動相,流速為1.0mL/min,檢測波長250nm。
測定腦得生片中葛根素的含量,采用高效液相色譜儀色譜柱DiamonsilTM (鉆石) C18(200mm×4.6mm,5μm);流動相:乙腈-甲醇-0.1%枸櫞酸溶液(5:25:75);紫外檢測波長250nm;柱溫室溫。制備樣品溶液時,一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流動相或鹽酸溶液等為溶劑,采用超聲法提取。
測定葛根沖劑中葛根素含量,采用薄層- 紫外分光光度法,薄層層析硅膠G板,以氯仿-甲醇-水(7:28:0.2)為展開劑,在紫外燈(365nm)下定葛根素位置,刮下斑點,用甲醇洗脫,測定波長為251±1nm。
測定通脈顆粒劑中葛根素及阿魏酸的含量,采用雙波長(λ1= 250nm ,λ2=313nm) 梯度洗脫法。高效液相色譜儀色譜柱KromasilC18柱(4.6mm×250mm,5μm);柱溫為30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脫;檢測波長為250nm;柱溫30℃。