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技術支持

凱氏定氮儀原理和操作步驟

時間:2015-10-20 9:32:40      閱讀:1625

一、凱氏定氮儀原理

蛋白質是含氮的有機化合物,食品與硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定,根據酸的消耗量乘以換算系數,即為蛋白質含量。

1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4,濃H2SO4作用下,硝化生成(NH4)2SO4

反應式為2NH2 H2S04 2H=(NH4)2S04(其中CuSO4做催化劑)

2.在凱氏定氮器中與堿作用,通過蒸餾釋放出NH3,收集于H3BO3溶液中

反應式為: (NH4)2SO4 2NaOH=2NH3 2H2O Na2SO4,2NH3 4H3BO3=(NH4)2B4O7 5H2O

3.用已知濃度的H2SO4(或HCI)標準溶液滴定,根據HCI消耗的量計算出氮的含量,然后乘以相應的換算因子,既得蛋白質的含量。

反應式為:(NH4)2B4O7 H2SO4 5H2O=(NH4)2SO4 4H3BO3(NH4)2B4O7 2HCl 5H2O=2NH4Cl 4H3BO3

二、凱氏定氮儀操作步驟

(一)消化

1、準備6個凱氏燒瓶,標號。1、2、3號燒瓶中分別加入適當濃度的蛋白溶液1.0mL,樣品要加到燒瓶底部,切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g,濃硫酸2.0mL,30%過氧化氫1.0mL。4、5、6號燒瓶作為空白對照,用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質,對樣品測定進行校正。4、5、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液,其余所加試劑與1、2、3號燒瓶相同。

2、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上,接好抽氣裝置。先用微火加熱煮沸,此時燒瓶內物質炭化變黑,并產生大量泡沫,務必注意防止氣泡沖出管口。待泡沫消失停止產生后,加大火力,保持瓶內液體微沸,至溶液澄清后,再繼續加熱使消化液微沸15min。在消化過程中要隨時轉動燒瓶,以使內壁粘著物質均能流入底部,以保證樣品完全消化。消化時放出的氣體內含SO2,具有強烈刺激性,因此自始自終應打開抽水泵將氣體抽入自來水排出。整個消化過程均應在通風櫥中進行。消化完全后,關閉火焰,使燒瓶冷卻至室溫。

(二)蒸餾、吸收蒸餾是在凱氏定氮儀內進行的。


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