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行業應用

紫外分光光度法測定過氧化氫含量

時間:2015-7-2 11:02:21      閱讀:2797

一、原理

H2O2與硫酸鈦(或氯化鈦)生成過氧化物—鈦復合物黃色沉淀,可被H2SO4溶解后,在415nm波長下比色測定。在一定范圍內,其顏色深淺與H2O2濃度呈線性關系。

二、儀器和用具

研缽;移液槍0.2ml和槍頭,5ml×1支;容量瓶10ml×7個,離心管5ml×8支;離心機紫外可見分光光度計

三、試劑

100μmol/L H2O2試劑;2mol/L硫酸;5%(W/V)硫酸鈦;丙酮;濃氨水。

30% H2O2指的是過氧化氫溶液的質量比,其密度為1.1g/cm3,而過氧化氫的分子量是34.02,通過這些參數,我們可以推算出30%的過氧化氫的摩爾濃度為9.7mol/L.

四、方法

1.制作標準曲線:取10ml離心管7支,順序編號,加入試劑。測定H2O2濃度標準曲線配置表。

待沉淀完全溶解后,將其小心轉入10ml容量瓶中,并用蒸餾水少量多次沖洗離心管,將洗滌液合并后定容至10ml刻度,415nm波長下比色。

2.樣品提取和測定

(1)稱取新鮮植物組織2~5g(視H2O2含量多少而定),按材料與提取劑1∶1的比例加入4℃下預冷的丙酮和少許石英砂研磨成勻漿后,轉入離心管3000 r/min下離心10min,棄去殘渣,上清液即為樣品提取液。

(2)用移液管吸取樣品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸鈦和濃氨水,待沉淀形成后3000rpm/min離心10min,棄去上清液。沉淀用丙酮反復洗滌3~5次,直到去除植物色素。(3)向洗滌后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后,與標準曲線同樣的方法定容并比色。

3.結果計算

     植物組織中H2O2含量(μmol/g Fw)=

式中  C—標準曲線上查得樣品中H2O2濃度(μmol);

         Vt—樣品提取液總體積(ml);

         V1—測定時用樣品提取液體積(ml);

         FW—植物組織鮮重(g)。

文章來源:中國化工儀器網

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